物體內的烯醇丙酮基莽草素磷酸合成酶，從而抑制莽草素向苯丙氨酸、酪氨酸及色氨酸的轉化，使蛋白質合成受到干擾，導致植物死亡。草甘膦是通過莖葉吸收后傳導到植物各部位的，可防除單子葉和雙子葉、一年生和多年生、草本和灌木等40多科的植物。草甘膦入土后很快與鐵、鋁等金屬離子結合而失去活性，對土壤中潛藏的種子和土壤微生物無不良影響。
初應用于橡膠園防除茅草及其他雜草，可使橡膠樹提早1年割膠，老橡膠樹增產。現逐步推廣于林業、果園、桑園、茶園，稻麥、水稻和油菜輪作地等。各種雜草對草甘膦的敏感程度不同，因而用藥量也不同。如稗、狗尾草、看麥娘、牛筋草、馬唐、豬殃殃等一年生雜草，用藥量以有效成分計為610.5 g/100m。對車前子、小飛蓬、鴨跖草等用藥量以有效成分計為11.415g/100m。對白茅、硬骨草、蘆葦等則需1830g/100m，一般對水34.5kg，對雜草莖葉均勻定向噴霧。一般闊葉雜草在萌芽早期或開花期，禾本科在拔節晚期或抽穗早期每畝用藥量兌水20-30公斤噴霧。已割除莖葉的植株應待雜草丙生至有足夠的新生葉片時再施藥。防除多年生雜草時一次藥量分2次，間隔5天施用能提高防效。
防除蘋果園、桃園、葡萄園、梨園、茶園、桑園和農田休閑地雜草，對稗狗尾草、看麥娘、牛筋草、 馬唐、蒼耳、藜、繁縷、豬殃殃等 一年生雜草。
草甘膦接觸綠色組織后才有殺傷作用。由于各種雜草對草甘膦的敏感度不同，因而用藥量也不同。
1.果園、桑園等除草 防除1年生雜草每畝用10水劑0.5-1公斤，防除多年生雜草每畝用10水劑1-1.5公斤。對水20-30公斤，對雜草莖葉定向噴霧。
2.農田除草 農田倒茬播種前防除田間已生長雜草，用藥量可參照果園除草。棉花生長期用藥，需采用帶罩噴霧定向噴霧。每畝用10水劑0.5-0.75公斤，兌水20-30公斤。
3.休閑地、田邊、路邊除草 于雜草4-6葉期，每畝用10水劑0.5-1公斤，加柴油100毫升，兌水20-30公斤，對雜草噴霧。
4.對于一些惡性雜草，如香附子蘆葦等，可每畝地按照200克加入助劑，除草效果好。
