多肽合成是一個固相合成順序順序一般從C端(羧基端)向N端(氨基端)合成。過去的多肽合成是在溶液中進行的稱為液相合成法。從1963年Merrifield發展成功了固相多肽合成方法以來,經過不斷的改進和完善,到今天固相法已成為多肽和蛋白質合成中的一個常用技術,表現出了經典液相合成法無法比擬的優點,從而大大的減輕了每步產品提的難度。多肽合成總的來說分成兩種:固相合成和液相多肽合成。
多肽合成技術
Merrifield首次提出了固相多肽合成方法(SPPS)以來,此技術的優勢受大眾青睞,所以目前大眾比較長使用的多肽合成技術手段就是固相合成技術。固相合成肽技術是液相合成肽技術的升華。液相合成技術,也可進行多肽的合成,通常此方法會導致消旋的副反應,或在強堿存在時形成5(4H)-oxaylones和N-acylurea而受到影響。慶幸地是,這些副反應能小化,但是還不能完全消除。
固相多肽合成原理
1963年,Merrifield提出了固相多肽合成方法,由于其合成方便,迅速,成為多肽合成的方法,而且帶來了多肽有機合成上的一次革命,并成為了一支獨立的學科——固相有機合成,固相合成的發明同時促進了肽合成的自動化。
例如,國肽生物多肽合成主要是采用Fmoc合成法。Fmoc合成法采用Fmoc為α-氨基的保護基,側鏈保護采用芐醇類。合成時將一個Fmoc-氨基酸衍生物共價交聯到樹脂上,用堿脫除Fmoc,用三乙胺中和游離的氨基末端,然后通過DCC活化、偶聯下一個氨基酸,脫保護多采用HF法或TFMSA(三氟甲磺酸)法。
多肽合成服務種類
多肽合成服務通常有線性肽合成服務、多種難肽合成服務、修飾肽合成服務、以及部分多肽合成公司還會提供多肽定制服務,定制出有針對性的合成肽。
目前有多肽合成公司提供的線性肽合成可達150個氨基酸,在修飾肽合成上,能提供常見修飾,磷酸化(Ser/Thr/Tyr),環化(酰胺環/二硫鍵環),熒光標記(5(6)-FAM,FITC,CY5,RhodamineB,PNA,EDNAS/dabcyl等),生物素標記(Biotin,Lys(Biotin))/復合抗原(MAP)/含D型氨基酸,及各種氨基酸衍生物均可合成。
多肽產物度選擇
常見的質譜級多肽度,一般要求